Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PGRMC1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401945-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PGRMC1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PGRMC1 Double-Nickase-Plasmid (h) und PGRMC1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PGRMC1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PGRMC1: sc-393015
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PGRMC1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401945-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PGRMC1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401945-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Progesteronrezeptor-Membrankomponente 1 (PGRMC1) ist ein häm-bindendes, membranassoziiertes Protein, das an nichtklassischen Progesteron-Signalwegen, am Sterolstoffwechsel und an der Regulation der Aktivität von Cytochrom-P450-Enzymen beteiligt ist. Es ist überwiegend im endoplasmatischen Retikulum und in weiteren Membrankompartimenten lokalisiert, wo es die Lipidhomöostase, den vesikulären Transport und zelluläre Stressantworten beeinflusst, einschließlich Signalwegen, die mit Proliferation und Überleben verknüpft sind. PGRMC1 wurde mit der Reproduktionsbiologie und der metabolischen Regulation in Verbindung gebracht, und veränderte Expressionsmuster wurden in mehreren Krankheitskontexten beschrieben, darunter in der Krebsbiologie und bei neurodegenerativen Prozessen. Diese Eigenschaften machen PGRMC1 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien zur membranständigen Progesteron-Signalübertragung, zur Redox-/Häm-Biologie und zu P450-zentrierten metabolischen Netzwerken.
PGRMC1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PGRMC1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PGRMC1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PGRMC1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PGRMC1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.