PGDH CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402622-ACT

Das humane HPGD kodiert die 15‑Hydroxyprostaglandin‑Dehydrogenase (PGDH), das geschwindigkeitsbestimmende Enzym, das für die NAD+-abhängige Oxidation und Inaktivierung bioaktiver Prostaglandine wie PGE2 verantwortlich ist. Durch die Kontrolle des Prostanoid-Umsatzes moduliert PGDH die Signaloutputs der Prostaglandin/COX-Achse, die Entzündungen, die epitheliale Homöostase, angiogene Signale und Gewebeumbau beeinflussen. Eine veränderte HPGD-Aktivität verschiebt das lokale Eicosanoid-Gleichgewicht und wird häufig in Kontexten untersucht, in denen eine dysregulierte Prostaglandin-Metabolisierung zu aberranter Immun-Signalgebung und proliferativen Phänotypen beiträgt. Als Gatekeeper des Prostaglandin-Katabolismus ist HPGD ein nützlicher Knotenpunkt, um das Zusammenspiel zwischen Entzündungsmediatoren, metabolischem Zustand und transkriptionellen Programmen zu analysieren.

PGDH Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HPGD-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PGDH Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HPGD-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HPGD-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PGDH-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HPGD-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PGDH-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PGDH-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HPGD-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.