Plásmido CRISPR de Activación (h) PGD2 synthase: sc-402272-ACT

PTGDS codifica la prostaglandina D2 sintasa (sintasa de PGD2), una enzima que cataliza la conversión de PGH2 en prostaglandina D2, un mediador lipídico bioactivo de la vía del ácido araquidónico/eicosanoides. La señalización de PGD2 influye en el tono inflamatorio, las respuestas vasculares y del músculo liso, la regulación del ciclo sueño–vigilia y la quimiotaxis de células inmunitarias a través de receptores prostanoides aguas abajo y redes lipídicas relacionadas. La expresión de PTGDS es destacada en tejidos como el cerebro y las meninges, y puede modular el equilibrio local de prostaglandinas que determina procesos neuroinflamatorios y asociados a barreras. La producción desregulada de prostaglandinas y las vías asociadas a PTGDS se estudian en contextos que incluyen la inflamación alérgica, la neuroinflamación y la biología del microambiente tumoral, donde los mediadores lipídicos afectan el estado celular y la señalización intercelular.

PGD2 synthase El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PTGDS sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PGD2 synthase El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PTGDS en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PTGDS, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PGD2 synthase. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PTGDS y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PGD2 synthase en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PGD2 synthase en células tumorales con expresión de PTGDS silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.