Plasmide CRISPR d'Activation (h) PGC1a: sc-400070-ACT

PPARGC1A code pour le coactivateur transcriptionnel PGC1a, un régulateur central de la biogenèse mitochondriale et du métabolisme oxydatif dans les cellules humaines. PGC1a intègre des signaux issus de voies de détection de l’état énergétique et de réponse au stress, notamment la signalisation dépendante d’AMPK et des sirtuines, afin de coordonner des programmes transcriptionnels contrôlant l’oxydation des acides gras, la phosphorylation oxydative et les défenses antioxydantes via des partenaires tels que les PPAR, les ERR et NRF1/2. Une activité altérée de PPARGC1A/PGC1a a été associée à une dérégulation métabolique et à une altération de la bioénergétique cellulaire, et elle est fréquemment étudiée dans des contextes tels que la résistance à l’insuline, l’obésité, les maladies neurodégénératives et l’énergétique des cardiomyocytes. En tant que nœud reliant la disponibilité des nutriments au contrôle transcriptionnel, PGC1a est largement utilisé pour étudier la fonction mitochondriale, l’homéostasie rédox et les réponses adaptatives au stress physiologique.

PGC1a Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PPARGC1A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PGC1a Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PPARGC1A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PPARGC1A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PGC1a. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PPARGC1A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PGC1a au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PGC1a dans les cellules tumorales présentant une expression de PPARGC1A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.