Peroxin 3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-425227

概要

Pex3はペルオキシン3をコードしており、ペルオキシソーム生合成に必須の中核因子です。ペルオキシソーム膜に局在し、マトリックスタンパク質の輸入に必要な追加のペルオキシンをリクルートすることで、膜アセンブリーの開始を助けます。ペルオキシソーム形成におけるこの役割を通じて、PEX3は超長鎖脂肪酸のβ酸化、エーテルリン脂質（プラスマローゲン）合成、活性酸素種（ROS）の解毒などの脂質代謝経路を支えます。ペルオキシソーム機能の喪失は細胞のレドックス恒常性と膜脂質組成を乱し、ミトコンドリアとのクロストークや炎症シグナル伝達に影響を及ぼします。マウスでは、Pex3はペルオキシソーム生合成異常のモデル化や、ペルオキシソーム喪失が神経発生、肝細胞代謝、全身のエネルギーバランスに与える影響を検討する目的で、しばしば研究に用いられます。

Peroxin 3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPex3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Pex3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Pex3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Peroxin 3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Peroxin 3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Pex3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Peroxin 3の機能に不可欠なPex3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Pex3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Peroxin 3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPeroxin 3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Pex3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Peroxin 3 HDRプラスミド（m）および Peroxin 3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPex3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPex3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。