periplakin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402350-ACT

ヒトPPLは、プラキンファミリーに属する細胞骨格連結タンパク質であるペリプラキンをコードしており、中間径フィラメントをデスモソームおよび角化細胞被膜（cornified envelope）に結び付けることで、上皮および内皮の機械的安定性を支えます。ペリプラキンは、デスモソームの組み立て、ケラチンネットワークの構築、分化や創傷応答に伴う細胞骨格の再編に関与し、細胞接着やストレス応答経路に関連するシグナル伝達の出力にも影響を与え得ます。PPLの発現量や局在の変化は、炎症性皮膚疾患やがんを含む複数の上皮性病態で報告されており、細胞—細胞間接着の完全性や遊走挙動の変化が重要となります。細胞周辺部における足場（スキャフォールド）として、ペリプラキンはバリア形成、上皮極性、ならびに接着結合依存的な増殖・浸潤制御の文脈でしばしば研究されています。

periplakin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PPLの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

periplakin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PPL 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPPL転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性periplakinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPPL遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるperiplakin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPPL発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるperiplakin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。