Perilipin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401305

概要

PLIN1は、脂肪滴関連リン酸化タンパク質であるペリリピン1をコードしており、脂肪細胞におけるトリグリセリドの貯蔵とリポリシス（脂肪分解）を、脂肪滴表面へのリパーゼのアクセスを制御することで調節する。ペリリピンは、cAMP/PKA依存的なリン酸化イベントと脂肪組織での脂質動員を統合し、ABHD5/CGI-58などの補因子や、ATGLおよびHSLを含む酵素との相互作用を協調させる。脂肪滴の形成（生合成）とターンオーバーにおける役割を通じて、PLIN1は細胞のエネルギーホメオスタシス、脂肪酸フラックス、ならびにアディポカインに関連する代謝シグナル伝達に影響を与える。PLIN1の遺伝学的・機能的変化は、リポジストロフィー表現型や代謝調節異常を含むヒトの脂肪組織機能障害と関連しており、関連する細胞モデルにおける脂質取り扱いの研究ターゲットとして有用である。

Perilipin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPLIN1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PLIN1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PLIN1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Perilipinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Perilipinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PLIN1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Perilipinの機能に不可欠なPLIN1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PLIN1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Perilipin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPerilipin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PLIN1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Perilipin HDRプラスミド（h）および Perilipin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPLIN1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPLIN1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。