Per1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-401260-LAC

O PER1 humano (Period Circadian Regulator 1) codifica a proteína Per1, um componente central do relógio circadiano molecular que ajuda a gerar ritmos de ~24 horas por meio de circuitos de retroalimentação transcricional–traducional com CLOCK/ARNTL (BMAL1), proteínas CRY e outros membros da família PER. A Per1 modula o controle circadiano da progressão do ciclo celular, as respostas a danos no DNA, a expressão de genes metabólicos e a sinalização endócrina ao moldar programas de transcrição rítmica em diferentes tecidos. A atividade desregulada de PER1 e o desalinhamento circadiano têm sido associados a alterações na regulação sono–vigília e a ligações mais amplas com fenótipos metabólicos e neuropsiquiátricos, bem como a processos oncogênicos nos quais checkpoints controlados pelo relógio e vias de estresse são perturbados. Assim, a pesquisa sobre PER1 é relevante para estudos de cronobiologia, regulação transcricional e respostas celulares ao estresse dependentes do tempo em sistemas modelo humanos.

As Partículas de Ativação Lentivirais Per1 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de PER1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Per1 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição PER1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Per1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo PER1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.