Peptide YY CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403446-ACT

Das humane Gen **PYY** kodiert Peptid YY, ein darmabgeleitetes endokrines Peptid, das in erster Linie von enteroendokrinen L‑Zellen als Reaktion auf die Nährstoffaufnahme freigesetzt wird. Peptid YY vermittelt neuroendokrine Signalübertragung über G‑Protein‑gekoppelte Rezeptoren der Y‑Familie und moduliert cAMP‑gekoppelte Signalwege, die die Appetitregulation, die gastrointestinale Motilität und die pankreatische Sekretion beeinflussen. In peripheren Geweben und im zentralen Nervensystem trägt PYY zu einer koordinierten metabolischen Homöostase sowie zur Kommunikation entlang der Darm‑Hirn‑Achse bei. Eine veränderte PYY‑Expression oder -Sekretion wurde mit einer Dysregulation des Energiehaushalts und metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was seine Verwendung als molekularen Readout in Studien zu Adipositas, zur Physiologie im Kontext von Typ‑2‑Diabetes und zur gastrointestinalen Funktion unterstützt.

Peptide YY Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PYY-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Peptide YY Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PYY-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PYY-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Peptide YY-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PYY-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Peptide YY-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Peptide YY-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PYY-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.