Plasmide Double Nickase (m) PELP1: sc-429042-NIC

PELP1 (protéine 1 riche en proline, acide glutamique et leucine) est un corégulateur des récepteurs nucléaires et une protéine d’échafaudage qui intègre, dans les cellules de souris, la signalisation du récepteur des œstrogènes et d’autres récepteurs stéroïdiens avec le remodelage de la chromatine et le contrôle transcriptionnel. Elle coordonne des interactions avec des modificateurs épigénétiques et des complexes de transcription, influençant la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et des programmes liés à la biogenèse des ribosomes. PELP1 a été reliée à des voies telles que la signalisation ERα/SRC, le dialogue croisé MAPK et PI3K/AKT, ainsi qu’à la régulation de programmes d’expression génique qui façonnent la prolifération et la différenciation. Une activité et une localisation dérégulées de PELP1 ont été associées à une altération de la signalisation hormonale et à des réseaux transcriptionnels oncogènes dans des modèles de biologie du cancer, ce qui étaye des études mécanistiques des phénotypes pilotés par les récepteurs nucléaires.

PELP1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Pelp1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Pelp1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Pelp1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Pelp1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.