Peg10 Lentiviral Activation Particles (m): sc-431278-LAC

Die Maus Peg10 (paternally expressed gene 10) kodiert ein domestiziertes, von Retrotransposons abgeleitetes Gag/Pol-ähnliches Protein, das genomisch geprägt (imprinted) ist und für die Plazentaentwicklung sowie die Differenzierung von Trophoblasten essenziell ist. PEG10 ist an Netzwerken der RNA-Bindung und von Protein-Protein-Interaktionen beteiligt, die Zellüberleben, Proliferation und Linienfestlegung beeinflussen, und wurde mit Signalwegen in Verbindung gebracht, die die epithelial-mesenchymale Transition, den ubiquitinvermittelten Proteinabbau und autophagiebezogene Prozesse regulieren. Eine fehlregulierte PEG10-Expression wurde in mehreren Krebs-Kontexten sowie bei Zuständen der Gewebe-Remodellierung beschrieben, was PEG10 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Wachstumskontrolle und stressadaptiven Transkriptionsprogrammen macht. In Mausmodellen wird Peg10 häufig hinsichtlich seiner Rollen in der entwicklungsbiologischen Genregulation, der Imprinting-Biologie und von Abhängigkeiten in der onkogenen Signalgebung untersucht.

Peg10 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Peg10-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Peg10 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Peg10-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Peg10-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Peg10-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.