PEDF CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400849-ACT

SERPINF1は、色素上皮由来因子（PEDF）をコードしています。PEDFは分泌性のserpinファミリーに属する糖タンパク質で、血管新生、炎症、ならびに組織恒常性を強力に制御する因子として機能します。PEDFは内皮細胞の生存や遊走を調節し、細胞外マトリックスのリモデリングや酸化ストレス応答にも影響を与えることで、複数の組織における血管系および神経栄養性のバランス維持に寄与します。SERPINF1/PEDFの発現変化は、血管リモデリングの異常や線維化プログラムの破綻と関連するとされ、眼の新生血管性疾患や、より広範なストローマ微小環境の変化との関連も報告されています。さらに、SERPINF1の機能喪失（loss-of-function）は骨格の脆弱性表現型にも関与しており、PEDFが結合組織およびミネラリゼーション（骨の石灰化）生物学において重要な役割を担うことを示しています。

PEDF CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SERPINF1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PEDF CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SERPINF1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSERPINF1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PEDFの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSERPINF1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPEDF依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSERPINF1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPEDF経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。