Plasmide CRISPR d'Activation (h) PEDF: sc-400849-ACT

SERPINF1 code le facteur dérivé de l’épithélium pigmentaire (PEDF), une glycoprotéine sécrétée de la famille des serpines qui agit comme un puissant régulateur de l’angiogenèse, de l’inflammation et de l’homéostasie tissulaire. Le PEDF module la survie et la migration des cellules endothéliales et influence le remodelage de la matrice extracellulaire ainsi que les réponses au stress oxydatif, contribuant à l’équilibre vasculaire et neurotrophique dans de nombreux tissus. Une expression altérée de SERPINF1/PEDF a été associée à un remodelage vasculaire dérégulé et à des programmes fibrosants, avec des liens décrits entre autres avec des affections oculaires néovasculaires et, plus largement, des modifications du microenvironnement stromal. Par ailleurs, une perte de fonction de SERPINF1 est impliquée dans des phénotypes de fragilité osseuse, soulignant le rôle du PEDF dans la biologie du tissu conjonctif et de la minéralisation.

PEDF Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SERPINF1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PEDF Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SERPINF1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SERPINF1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PEDF. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SERPINF1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PEDF au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PEDF dans les cellules tumorales présentant une expression de SERPINF1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.