PECI CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406564

概要

ECI2は、過酸化小体に局在するD3,D2-エノイルCoAイソメラーゼ（PECI）をコードしており、これは不飽和脂肪酸アシルCoAの過酸化小体β酸化に必要な補助酵素です。PECIは、鎖長短縮の継続を可能にし、下流の脱水素反応やチオリシス反応との協調を担保する異性化反応を触媒することで、脂質分解および細胞のエネルギー恒常性を支えます。過酸化小体依存的な脂肪酸代謝における役割を通じて、ECI2は脂質シグナル伝達、酸化還元バランス、栄養ストレス下での代謝適応の制御にも寄与します。過酸化小体β酸化および不飽和脂肪酸処理の破綻は、代謝疾患の発症機序、脂質蓄積の表現型、ならびにがんや神経変性の研究文脈で観察される広範な代謝リモデリングとも関連しています。

PECI CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるECI2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ECI2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ECI2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PECIタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PECIシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ECI2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PECIの機能に不可欠なECI2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ECI2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PECI CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPECI CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ECI2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PECI HDRプラスミド（h）および PECI HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはECI2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のECI2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。