PEBP2β Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401983

Descripción general

CBFB codifica la subunidad beta del factor de unión al núcleo (core-binding factor) (PEBP2β), un cofactor que no se une al ADN y que heterodimeriza con los factores de transcripción RUNX para estabilizar la unión al ADN y coordinar programas de expresión génica que controlan la diferenciación hematopoyética, la osteogénesis y el desarrollo de células inmunitarias. A través de este complejo RUNX/CBF, CBFB contribuye a regular vías que gobiernan el compromiso del destino celular, la proliferación y redes transcripcionales específicas de linaje. La alteración de la transcripción dependiente de CBFB se asocia con una hematopoyesis aberrante y defectos del desarrollo, y CBFB se estudia con frecuencia en el contexto de reordenamientos cromosómicos y desregulación transcripcional en modelos de enfermedades hematológicas. Estas propiedades convierten a CBFB en un nodo clave para investigar la cooperación entre factores de transcripción, la regulación de potenciadores (enhancers) y los mecanismos de especificación de linaje.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PEBP2β (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CBFB en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CBFB junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CBFB tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PEBP2β.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CBFB para la investigación de la señalización de PEBP2β, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CBFB críticos para la función de PEBP2β
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CBFB para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PEBP2β CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PEBP2β CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CBFB. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PEBP2β (h) y el plásmido HDR PEBP2β (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CBFB para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CBFB definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.