PDZ-RhoGEF Double Nickase Plasmid (h): sc-403444-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PDZ-RhoGEF Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PDZ-RhoGEF Double-Nickase-Plasmid (h) und PDZ-RhoGEF Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ARHGEF11 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PDZ-RhoGEF: sc-166740
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PDZ-RhoGEF Double Nickase Plasmid (h) | sc-403444-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PDZ-RhoGEF Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403444-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ARHGEF11 kodiert PDZ-RhoGEF, einen RhoA-spezifischen Guanin-Nukleotid-Austauschfaktor, der die Signalübertragung aktivierter, an Gα12/13 gekoppelter GPCRs mit der Aktivierung von Rho-GTPasen und der nachgeschalteten Aktomyosin-Kontraktilität verknüpft. Über die Regulation des zytoskelettalen Umbaus, der Bildung von Stressfasern, der Dynamik fokaler Adhäsionen und der Zellpolarität beeinflusst PDZ-RhoGEF Prozesse wie Migration, Adhäsion und die Funktion der epithelialen Barriere. PDZ-Domänen-vermittelte Gerüstbildung (Scaffolding) und Signal-Crosstalk integrieren Eingänge aus der Rezeptorsignalgebung und aus Zellkontakt-/Junktionskomplexen, um den Output des Rho/ROCK-Signalwegs fein abzustimmen. Eine fehlregulierte RhoA-Signalgebung und Veränderungen in ARHGEF11-assoziierten Netzwerken wurden mit pathologischer Zellmotilität und Invasionsphänotypen sowie mit weiterreichenden, krankheitsrelevanten Signaländerungen in onkologischen und entzündlichen Kontexten in Verbindung gebracht.
PDZ-RhoGEF Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ARHGEF11-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ARHGEF11 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ARHGEF11-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ARHGEF11-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.