PDZ-RhoGEF Double Nickaseプラスミド (h): sc-403444-NIC

ARHGEF11はPDZ-RhoGEFをコードしている。PDZ-RhoGEFはRhoA特異的なグアニンヌクレオチド交換因子（GEF）であり、活性化したGα12/13共役GPCRシグナル伝達をRho GTPaseの活性化へと結び付け、下流のアクトミオシン収縮性を制御する。PDZ-RhoGEFは、細胞骨格の再構築、ストレスファイバー形成、接着斑ダイナミクス、細胞極性の調節を通じて、遊走、接着、上皮バリア機能などの過程に影響を与える。PDZドメインを介した足場形成とシグナル伝達のクロストークにより、受容体シグナルと細胞接合複合体からの入力が統合され、Rho/ROCK経路の出力が調整される。RhoAシグナルの破綻やARHGEF11関連ネットワークの変化は、病的な細胞運動能や浸潤形質、ならびにがんや炎症の文脈における疾患関連のより広範なシグナル変化に関与することが示唆されている。

PDZ-RhoGEF ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ARHGEF11 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ARHGEF11内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ARHGEF11の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ARHGEF11が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。