PDP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406956

概要

ピルビン酸デヒドロゲナーゼ脱リン酸化酵素の触媒サブユニット2（PDP2）は、ミトコンドリアに局在する酵素で、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体（PDH複合体）を脱リン酸化して活性化します。これにより、ピルビン酸からアセチルCoAへの変換が促進され、解糖系由来の炭素がTCA回路へ流入する過程が調整されます。PDH活性を調節することで、PDP2は代謝の柔軟性、酸化還元（レドックス）バランス、細胞のエネルギー恒常性に寄与し、栄養状態と酸化的代謝を結び付けています。PDH–PDP軸の制御異常は、ミトコンドリア機能に影響する疾患や、糖・脂質利用が異常な状況でみられる代謝リプログラミングと関連しており、PDP2はミトコンドリアの生体エネルギー研究における有用な解析ノードとなります。またPDP2は、PDHのリン酸化状態を調節するシグナル入力や、その下流のアセチルCoA依存性プロセスを検討するための手がかりも提供します。

PDP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPDP2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PDP2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PDP2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PDP2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PDP2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PDP2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PDP2の機能に不可欠なPDP2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PDP2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PDP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPDP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PDP2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PDP2 HDRプラスミド（h）および PDP2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPDP2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPDP2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。