Plásmido CRISPR de Activación (h) PDLIM5: sc-405340-ACT

PDLIM5 codifica una proteína andamiaje que contiene dominios PDZ y LIM, se localiza en estructuras asociadas a la actina y conecta la organización del citoesqueleto con la transducción de señales. En células humanas, PDLIM5 participa en la regulación de la dinámica de la actina, la adhesión celular y las vías mecanosensibles al coordinar interacciones proteína–proteína en fibras de estrés y ensamblajes similares al disco Z. A través de estas funciones, influye en procesos como la morfología celular, la migración y la contractilidad, y se integra con redes de señalización de quinasas que responden a señales del citoesqueleto. La alteración de la expresión de PDLIM5 y de la actividad de sus vías se ha estudiado en el contexto de la biología de enfermedades cardiovasculares y neuropsiquiátricas, lo que respalda su utilidad como nodo para investigar mecanismos de señalización acoplados al citoesqueleto.

PDLIM5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PDLIM5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PDLIM5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PDLIM5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PDLIM5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PDLIM5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PDLIM5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PDLIM5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PDLIM5 en células tumorales con expresión de PDLIM5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.