Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PDK3 Double Nickase Plasmid (h): sc-404502-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PDK3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PDK3 Double-Nickase-Plasmid (h) und PDK3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PDK3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PDK3: sc-365378
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PDK3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404502-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PDK3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404502-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PDK3 kodiert die Pyruvatdehydrogenase-Kinase-Isoform 3, eine mitochondriale Ser/Thr-Kinase, die den Pyruvatdehydrogenase-Komplex phosphoryliert und hemmt. Dadurch wird die Umwandlung von Pyruvat zu Acetyl‑CoA begrenzt und der Kohlenstofffluss vom Citratzyklus (TCA-Zyklus) weg verlagert. Über diesen Kontrollpunkt verknüpft PDK3 Nährstoffverfügbarkeit und Hypoxiesignale mit der Glukoseoxidation, der Laktatproduktion und der umfassenderen mitochondrialen Bioenergetik. Eine dysregulierte PDK3-Aktivität wurde mit pathologischer metabolischer Reprogrammierung und einer veränderten Redox-Balance in Verbindung gebracht; berichtet wurden Assoziationen mit dem Stoffwechsel von Krebszellen sowie mit neuromuskulären und peripheren Nervenerkrankungen. Als Regulator des oxidativen Stoffwechsels wird PDK3 häufig in Zusammenhängen untersucht, die mitochondriale Stressantworten, glykolytische Abhängigkeit und metabolische Anpassung betreffen.
PDK3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PDK3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PDK3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PDK3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PDK3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.