PDIR CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405741

概要

PDIA5は、ヒトのプロテインジスルフィドイソメラーゼ関連タンパク質PDIRをコードしており、PDIRは小胞体に局在する酸化還元酵素として、酸化的タンパク質フォールディングおよびジスルフィド結合の異性化を支えます。プロテインジスルフィドイソメラーゼ（PDI）ファミリーの一員として、PDIRは分泌タンパク質や膜タンパク質の成熟を促進し、さらにアンフォールドタンパク質応答（UPR）の際に働くシャペロンネットワークと協調することで、小胞体プロテオスタシスに寄与します。PDIA5の活性は、小胞体の品質管理、レドックス恒常性、小胞体関連分解（ERAD）とも交差しており、これらの過程はがん、代謝ストレス、神経変性の状況でしばしば再編されます。PDIファミリー機能の変化は、ERストレスシグナルの亢進や分泌経路容量の変動と結び付くことが多く、PDIA5はレドックス依存的フォールディングの機構研究に有用な結節点となります。

PDIR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPDIA5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PDIA5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PDIA5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PDIRタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PDIRシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PDIA5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PDIRの機能に不可欠なPDIA5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PDIA5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PDIR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPDIR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PDIA5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PDIR HDRプラスミド（h）および PDIR HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPDIA5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPDIA5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。