PDI CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422099

概要

P4hbは、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ（PDI）をコードしている。PDIは小胞体に豊富に存在する酸化還元酵素で、ジスルフィド結合の形成、還元、異性化を触媒し、分泌タンパク質および膜タンパク質のフォールディングと成熟を支える。PDIは小胞体のプロテオスタシス・ネットワークの一員として、シャペロンや他の酸化還元酵素と協調し、酸化的タンパク質フォールディングと品質管理を制御するとともに、小胞体ストレスシグナル伝達やアンフォールドタンパク質応答（UPR）経路にも関与する。チオール－ジスルフィド交換活性やミスフォールド基質との相互作用を通じて、PDIはレドックス恒常性、タンパク質輸送、ならびにタンパク質毒性ストレス下における細胞生存の意思決定に影響を及ぼす。P4hb/PDI活性の破綻は、慢性的な小胞体ストレスやレドックスバランスの変化を特徴とする病態と関連づけられており、神経変性、代謝機能障害、がん生物学のモデルにおける機序研究において重要な標的となっている。

PDI CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるP4hb遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、P4hb内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、P4hbのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PDIタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PDIシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、P4hb欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PDIの機能に不可欠なP4hbエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、P4hbゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PDI CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPDI CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、P4hb遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PDI HDRプラスミド（m）および PDI HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはP4hbホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のP4hb標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。