Plasmide Double Nickase (h) PDH-E1α: sc-401044-NIC

PDHA1 code la sous-unité E1α du complexe pyruvate déshydrogénase (PDH), qui catalyse la décarboxylation oxydative du pyruvate afin de produire de l’acétyl-CoA et de relier la glycolyse au cycle de l’acide tricarboxylique (cycle de Krebs). L’activité PDH‑E1α soutient la respiration mitochondriale, régule le flux de carbone vers la biosynthèse lipidique et influence l’équilibre rédox via la production en aval de NADH. PDHA1 est régulé par des kinases et des phosphatases de la PDH, qui ajustent l’activité du complexe PDH en fonction de la disponibilité en nutriments et des besoins énergétiques cellulaires. Une altération de la fonction de PDHA1 est associée à un remodelage métabolique et à une dysfonction mitochondriale, et est étudiée dans des contextes tels que l’acidose lactique, des phénotypes neurodéveloppementaux et des bioénergétiques modifiées dans des modèles de maladies prolifératives.

PDH-E1α Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PDHA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PDHA1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PDHA1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PDHA1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.