PDGF Receptor beta/PDGFRB Double Nickase Plasmid (h): sc-400187-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PDGF Receptor beta/PDGFRB Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PDGF Receptor beta/PDGFRB Double-Nickase-Plasmid (h) und PDGF Receptor beta/PDGFRB Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PDGFRB abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PDGF Receptor beta/PDGFRB: sc-374573
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PDGF Receptor beta/PDGFRB Double Nickase Plasmid (h) | sc-400187-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PDGF Receptor beta/PDGFRB Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400187-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PDGFRB kodiert den Beta-Rezeptor für den plättchenabgeleiteten Wachstumsfaktor (PDGFRβ), eine Rezeptor-Tyrosinkinase, die PDGF-Liganden bindet und dadurch Proliferation, Migration und Überleben von Perizyten und vaskulären glatten Muskelzellen reguliert. Die ligandeninduzierte Dimerisierung und Autophosphorylierung aktiviert nachgeschaltete Signalwege über PI3K–AKT, RAS–MAPK, PLCγ und STAT und koordiniert so Zytoskelett-Umbau, Dynamik der extrazellulären Matrix und die angiogene Unterstützung endothelialer Netzwerke. PDGFRB ist zentral für den stromal-vaskulären Austausch während der Entwicklung und der Gewebeumgestaltung und wird häufig im Zusammenhang mit Fibrose, der Biologie des Tumormikromilieus und vaskulären Erkrankungen untersucht. Veränderte PDGFRB-Signalgebung und genomische Rearrangements wurden mit proliferativen und neoplastischen Prozessen in Verbindung gebracht, wodurch PDGFRB einen wichtigen Knotenpunkt zur Analyse von Abhängigkeiten in Wachstumsfaktor-Rezeptor-Signalnetzwerken darstellt.
PDGF Receptor beta/PDGFRB Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PDGFRB-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PDGFRB abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PDGFRB-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PDGFRB-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.