PDGF Receptor beta/PDGFRB CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400187-ACT

PDGFRB kodiert den vom Thrombozytenwachstumsfaktor abgeleiteten Wachstumsfaktor‑Rezeptor Beta (PDGFRβ), eine Rezeptor‑Tyrosinkinase, die PDGF‑BB und verwandte Liganden bindet und so Proliferation, Überleben und Migration mesenchymaler Zellen reguliert. Nach Aktivierung initiiert PDGFRβ eine Autophosphorylierung und leitet Signale über die PI3K–AKT‑, RAS–MAPK‑, PLCγ–PKC‑ und STAT‑Signalwege weiter, wodurch Zytoskelett‑Remodellierung und Interaktionen mit der extrazellulären Matrix koordiniert werden. Dieser Rezeptor ist zentral für die Gefäßentwicklung und die Rekrutierung von Perizyten und unterstützt damit die Stabilisierung von Gefäßen sowie Prozesse der Gewebereparatur. Eine fehlregulierte PDGFRB‑Signalgebung oder aberrante PDGFRB‑Fusionen sind an fibroproliferativen Zuständen, pathologischer Angiogenese und der Tumor‑Stroma‑Kommunikation beteiligt, was PDGFRB zu einem wichtigen Ziel für mechanistische Studien der Stromabiologie macht.

PDGF Receptor beta/PDGFRB Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PDGFRB-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PDGF Receptor beta/PDGFRB Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PDGFRB-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PDGFRB-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PDGF Receptor beta/PDGFRB-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PDGFRB-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PDGF Receptor beta/PDGFRB-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PDGF Receptor beta/PDGFRB-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PDGFRB-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.