PDGF Receptor alpha/PDGFRA CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400107-ACT

PDGFRA kodiert den platelet-derived growth factor receptor alpha (PDGFRα), eine Rezeptor-Tyrosinkinase, die PDGF-Liganden bindet und dadurch Autophosphorylierung sowie nachgeschaltete Signalübertragung über die PI3K–AKT-, RAS–MAPK- und PLCγ-Signalwege auslöst. Diese Signalgebung reguliert Zellproliferation, Überleben, Migration und den Umbau der extrazellulären Matrix und spielt eine wichtige Rolle in der mesenchymalen und stromalen Biologie während der Entwicklung und der Gewebehomöostase. Eine fehlregulierte PDGFRA-Aktivität ist an abweichenden Wachstumsfaktor-Signalprogrammen beteiligt, wie sie in mehreren krebsassoziierten Kontexten sowie in fibroproliferativen und entzündlichen Mikroumgebungen beobachtet werden. Als Zelloberflächen-Kinaseknoten wird PDGFRA häufig im Hinblick auf Mechanismen untersucht, die den Rezeptortransport, die ligandenabhängige Signalkinetik und das Crosstalk zwischen Signalwegen steuern.

PDGF Receptor alpha/PDGFRA Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PDGFRA-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PDGF Receptor alpha/PDGFRA Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PDGFRA-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PDGFRA-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PDGF Receptor alpha/PDGFRA-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PDGFRA-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PDGF Receptor alpha/PDGFRA-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PDGF Receptor alpha/PDGFRA-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PDGFRA-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.