Plasmide CRISPR d'Activation (h) PDGF-D: sc-402406-ACT

PDGFD code le facteur de croissance D dérivé des plaquettes (PDGF‑D), un facteur de croissance sécrété qui signale principalement via PDGFRβ afin de réguler la prolifération et la migration des cellules mésenchymateuses, ainsi que le remodelage de la matrice extracellulaire. L’activation de l’axe PDGF‑D–PDGFR mobilise en aval les voies MAPK/ERK, PI3K/AKT et STAT, qui coordonnent des processus liés à l’angiogenèse et le dialogue stroma–épithélium. Une expression dérégulée de PDGFD a été associée à une activation fibroblastique altérée, au remodelage vasculaire et à des phénotypes invasifs dans plusieurs contextes pertinents pour la maladie, ce qui en fait un nœud utile pour étudier la signalisation paracrine dans des microenvironnements complexes. Des modèles in vitro et in vivo exploitant la modulation de PDGF‑D sont couramment utilisés pour analyser les changements de motilité cellulaire, de survie et de dépôt de matrice induits par les facteurs de croissance.

PDGF-D Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PDGFD sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PDGF-D Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PDGFD dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PDGFD, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PDGF-D. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PDGFD natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PDGF-D au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PDGF-D dans les cellules tumorales présentant une expression de PDGFD silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.