PDGF-B Double Nickaseプラスミド (h): sc-400586-NIC

ヒトPDGFBは、血小板由来成長因子Bサブユニット（PDGF-B）をコードしており、主にPDGFRβを介してシグナルを伝達する分泌性の二量体成長因子である。PDGF-Bは、周皮細胞のリクルート、血管成熟、ならびに間葉系細胞の増殖と遊走を制御する。PDGF-BはPI3K–AKT、RAS–MAPK、PLCγ–PKCなどの典型的な受容体型チロシンキナーゼ経路を活性化し、細胞外からの刺激を細胞骨格の再編成や生存プログラムへと結び付ける。正常な生理機能においてPDGF-Bは、間質区画における創傷修復、細胞外マトリックス動態、組織リモデリングの中核を担う。PDGFB/PDGFRシグナルの異常な制御は、異常血管新生、線維性リモデリング、がんにおける腫瘍間質相互作用に関与するとされ、PDGF-Bは微小環境駆動性の疾患プロセスを解明する機構研究でしばしば注目される。

PDGF-B ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PDGFB 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PDGFB内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PDGFBの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PDGFBが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。