PDGF-A Double Nickaseプラスミド (h): sc-400711-NIC

ヒトのPDGFAは、血小板由来増殖因子A（PDGF-A）をコードしている。PDGF-Aは分泌性のマイトジェンであり、主にPDGF受容体α、およびα/βヘテロ二量体を介してシグナルを伝達し、間葉系細胞の増殖、遊走、生存を制御する。PDGF-Aの活性化はMAPK/ERK、PI3K–AKT、PLCγの各シグナル伝達カスケードを作動させ、細胞外マトリックスのリモデリング、血管新生の支持、ならびに間質—上皮間コミュニケーションを協調的に制御する。PDGFA/PDGFRシグナルの破綻は線維化リモデリングや腫瘍微小環境の生物学に関与するとされ、傍分泌性の増殖因子シグナルの変化が血管系および間質のプログラムを再編し得る。そのためPDGFAは、発生パターニング、創傷治癒に関連する過程、増殖因子駆動の細胞状態遷移などの文脈で頻繁に研究されている。

PDGF-A ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PDGFA 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PDGFA内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PDGFAの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PDGFAが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。