PDGF-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400711

概要

PDGFAは、血小板由来成長因子A（platelet-derived growth factor A：PDGF-A）をコードしており、PDGF-Aは分泌型の二量体成長因子として主にPDGFRαを介してシグナルを伝達し、間葉系細胞の増殖、遊走、生存を制御します。PDGF-AはMAPK/ERKおよびPI3K/AKTシグナル伝達と連動する有糸分裂促進（ミトジェン）および走化性応答の主要な駆動因子であり、細胞外マトリックスのリモデリング、血管新生の支持、ストローマ—上皮間クロストークに寄与します。PDGF-A/PDGFRシグナルの異常制御は、線維化リモデリングや腫瘍関連ストローマの活性化に関与するとされ、細胞周期制御や組織微小環境のダイナミクスへの影響という観点からも頻繁に研究されています。またPDGFAは、傍分泌性の成長因子勾配が細胞運命や運動性を規定する発生過程や創傷修復モデルにおいても重要です。

PDGF-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPDGFA遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PDGFA内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PDGFAのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PDGF-Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PDGF-Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PDGFA欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PDGF-Aの機能に不可欠なPDGFAエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PDGFAゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PDGF-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPDGF-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PDGFA遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PDGF-A HDRプラスミド（h）および PDGF-A HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPDGFAホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPDGFA標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。