Partículas Lentivirales de Activación (m) PDE6β: sc-422166-LAC

El gen Pde6b del ratón codifica la subunidad β de la fosfodiesterasa 6 de cGMP (PDE6β) de los fotorreceptores de bastón, un efector central de la cascada de fototransducción rodopsina–transducina. Tras la activación inducida por la luz, PDE6β cataliza la hidrólisis de cGMP, disminuyendo el cGMP intracelular para favorecer el cierre de los canales regulados por cGMP y moldear la respuesta eléctrica del fotorreceptor. Este eje de señalización regula la homeostasis de cGMP y Ca²⁺ en los segmentos externos de los bastones y se integra con procesos posteriores que influyen en la supervivencia de los fotorreceptores y en la función de los circuitos retinianos. La alteración del recambio de cGMP dependiente de PDE6β se asocia estrechamente con fenotipos de degeneración retiniana hereditaria, lo que convierte a Pde6b en un objetivo clave para estudios mecanísticos de la función de los bastones y de los desequilibrios de señalización asociados a enfermedad.

Las partículas de activación lentiviral PDE6β (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Pde6b en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PDE6β (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Pde6b, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PDE6β. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Pde6b y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.