Plasmide Double Nickase (h) PD-ECGF: sc-403836-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PD-ECGF correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PD-ECGF Double Nickase (h) et le plasmide PD-ECGF Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TYMP. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PD-ECGF Antibody (PGF-44C): sc-47702
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) PD-ECGF | sc-403836-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) PD-ECGF | sc-403836-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **TYMP** code la thymidine phosphorylase, également appelée **facteur de croissance des cellules endothéliales dérivé des plaquettes** (PD‑ECGF), une enzyme cytosolique qui catalyse la phosphorolyse de la thymidine et de la désoxyuridine en thymine/uracile et en 2‑désoxyribose‑1‑phosphate, modulant ainsi la voie de sauvetage des nucléotides et l’équilibre intracellulaire des dNTP. En influençant la disponibilité des nucléosides et le métabolisme des phosphates de désoxyribose, le PD‑ECGF relie le catabolisme des pyrimidines aux réponses au stress de réplication de l’ADN, à l’homéostasie des nucléotides mitochondriaux et à des programmes cellulaires sensibles à l’état rédox. Une activité altérée de TYMP est impliquée dans la physiopathologie de l’encéphalomyopathie neurogastro-intestinale mitochondriale (MNGIE) et a été étudiée dans des contextes où le métabolisme des nucléosides croise la signalisation angiogénique et l’adaptation au microenvironnement tumoral. Ces caractéristiques font de TYMP une cible utile pour des études mécanistiques des flux de nucléosides, de la stabilité du génome et de phénotypes associés au métabolisme dans les cellules humaines.
PD-ECGF Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TYMP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TYMP. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TYMP. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TYMP.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.