PD-ECGF Double Nickaseプラスミド (h): sc-403836-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- PD-ECGF Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- PD-ECGFダブルニカースプラスミド（h）およびPD-ECGFダブルニカースプラスミド（h2）は、TYMPを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: PD-ECGF 抗体 (PGF-44C): sc-47702
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
PD-ECGF Double Nickaseプラスミド (h) | sc-403836-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PD-ECGF Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-403836-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトのTYMPは、チミジンホスホリラーゼ（血小板由来内皮細胞増殖因子：PD-ECGFとしても知られる）をコードしている。これは細胞質に局在する酵素で、チミジンおよびデオキシウリジンのホスホリシス反応を触媒し、チミン／ウラシルと2-デオキシリボース-1-リン酸を生成することで、ヌクレオチド・サルベージ経路や細胞内dNTPバランスの制御に寄与する。ヌクレオシドの利用可能性やデオキシリボースリン酸代謝に影響を与えることにより、PD-ECGFはピリミジン分解代謝を、DNA複製ストレス応答、ミトコンドリアのヌクレオチド恒常性、ならびにレドックス感受性の細胞プログラムと結び付けている。TYMP活性の変化はミトコンドリア神経胃腸脳症（MNGIE）の病態生物学に関与するとされ、またヌクレオシド代謝が血管新生シグナルや腫瘍微小環境への適応と交差する文脈でも研究されてきた。これらの特性により、TYMPはヒト細胞におけるヌクレオシドフラックス、ゲノム安定性、ならびに代謝関連表現型の機序解析に有用な標的となる。
PD-ECGF ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TYMP 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TYMP内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TYMPの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TYMPが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。