Plásmido CRISPR de Activación (m2) PCSK9: sc-430299-ACT-2

El gen Pcsk9 de ratón codifica la proproteína convertasa subtilisina/kexina tipo 9 (PCSK9), una proteasa de serina secretada que regula la homeostasis del colesterol al promover la degradación lisosomal del receptor de LDL y, de este modo, modular la captación hepática de LDL. La actividad de PCSK9 se integra con programas de biosíntesis lipídica dependientes de SREBP e influye en el metabolismo sistémico de las lipoproteínas, con funciones adicionales descritas en la señalización inflamatoria y en las respuestas al estrés metabólico. La disfunción o desregulación de Pcsk9/PCSK9 se asocia con hipercolesterolemia y fenotipos relevantes para la aterosclerosis, lo que la convierte en una diana ampliamente utilizada en estudios mecanísticos de la biología de las enfermedades cardiovasculares y metabólicas. La edición genética de Pcsk9 en ratón permite perturbaciones controladas del recambio de LDLR y del manejo de lípidos para el análisis de vías, el modelado de enfermedades in vivo y la validación de modificadores genéticos que afectan los rasgos lipídicos plasmáticos.

PCSK9 El plásmido de activación CRISPR (m2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Pcsk9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PCSK9 El plásmido de activación CRISPR (m2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Pcsk9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Pcsk9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PCSK9. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Pcsk9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PCSK9 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PCSK9 en células tumorales con expresión de Pcsk9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.