PCPE-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-411925

概要

PCOLCE2は、プロコラーゲンC-エンドペプチダーゼ増強因子タンパク質2（PCPE-2）をコードしています。PCPE-2は細胞外マトリックス（ECM）関連の糖タンパク質であり、BMP1／tolloid様プロテアーゼによるプロコラーゲンC末端プロペプチドのプロセシングを促進することで、コラーゲン線維形成およびマトリックス成熟を促します。コラーゲンの沈着とターンオーバーを調節することにより、PCPE-2は線維芽細胞の活性化、創傷修復、ならびに間質の力学特性の制御に関連する組織リモデリングプログラムに寄与します。PCOLCE2の発現変化やPCPE-2活性の異常は、線維化リモデリングや、細胞外マトリックス構築の破綻を特徴とするその他の病態に関与することが示唆されています。したがってヒトの系においてPCPE-2は、コラーゲン生合成経路やマトリックス駆動性シグナル伝達のクロストークを解析する上で有用な結節点となります。

PCPE-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPCOLCE2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PCOLCE2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PCOLCE2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PCPE-2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PCPE-2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PCOLCE2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PCPE-2の機能に不可欠なPCOLCE2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PCOLCE2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PCPE-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPCPE-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PCOLCE2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PCPE-2 HDRプラスミド（h）および PCPE-2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPCOLCE2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPCOLCE2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。