PCGF3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405260

Visão geral

PCGF3 (polycomb group ring finger 3) é um componente central do complexo repressivo Polycomb 1 (PRC1) não canônico, atuando como uma ligase E3 de ubiquitina em conjunto com RING1A/RING1B para catalisar a monoubiquitinação da histona H2A (H2AK119ub). Por meio dessa atividade, o PCGF3 contribui para a repressão transcricional mediada por Polycomb, a memória epigenética e a compactação da cromatina, que ajudam a coordenar programas de expressão gênica do desenvolvimento e decisões de destino celular. Complexos PRC1 contendo PCGF3 interagem com redes mais amplas de regulação da cromatina, incluindo o equilíbrio Polycomb/Trithorax e a comunicação cruzada com a metilação de H3K27 dependente do PRC2. A desregulação da sinalização de Polycomb e da composição de subunidades do PRC1 é frequentemente implicada no silenciamento gênico aberrante e na reprogramação transcricional observados no câncer e em outros distúrbios de etiologia epigenética, o que motiva estudos mecanísticos da função do PCGF3 em células humanas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PCGF3 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PCGF3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PCGF3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PCGF3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PCGF3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PCGF3 para a investigação da sinalização de PCGF3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PCGF3 críticos para a função PCGF3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PCGF3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PCGF3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo PCGF3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PCGF3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PCGF3 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR PCGF3 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PCGF3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PCGF3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.