PCB CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401254

概要

ヒトPC（ピルビン酸カルボキシラーゼ）遺伝子は、ビオチン依存性のミトコンドリア酵素をコードしており、ATPを駆動力としてピルビン酸をオキサロ酢酸へカルボキシル化します。これによりトリカルボン酸（TCA）回路の中間体が補充され、アナプレロシスが支えられます。PC活性は中心炭素代謝と糖新生、脂質新生、アミノ酸生合成を結び付け、ミトコンドリアのレドックスバランスや細胞のエネルギー恒常性に影響します。PCの発現や機能の変化は、先天性代謝異常に加え、がんや肝疾患など複数の病態で見られる代謝リプログラミングとも関連しており、アナプレロティックフラックスは増殖やストレス応答に影響し得ます。

PCB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPC遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PC内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PCのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PCBタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PCBシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PC欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PCBの機能に不可欠なPCエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PCゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PCB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPCB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PC遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PCB HDRプラスミド（h）および PCB HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPCホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPC標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。