Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
PCB Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401254
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- PCB El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico PCB, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PCB Anticuerpo (D-9): sc-365673
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
PCB Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401254 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
La PC humana (piruvato carboxilasa) codifica una enzima mitocondrial dependiente de biotina que cataliza la carboxilación del piruvato a oxaloacetato impulsada por ATP, reponiendo intermediarios del ciclo del ácido tricarboxílico (TCA) y favoreciendo la anaplerosis. La actividad de PC vincula el metabolismo central del carbono con la gluconeogénesis, la lipogénesis y la biosíntesis de aminoácidos, influyendo en el equilibrio redox mitocondrial y en la homeostasis energética celular. La expresión o función alteradas de PC se han asociado con errores congénitos del metabolismo y con la reprogramación metabólica observada en diversos contextos patológicos, incluidos el cáncer y los trastornos hepáticos, donde el flujo anaplerótico puede afectar la proliferación y las respuestas al estrés.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO PCB (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PC en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PC junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PC tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PCB.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PC para la investigación de la señalización de PCB, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de PC críticos para la función de PCB
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PC para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido PCB CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PCB CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PC. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PCB (h) y el plásmido HDR PCB (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PC para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PC definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.