Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
PCAF Plasmide Double Nickase (h): sc-400753-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PCAF Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PCAF Double Nickase Plasmid (h) e il PCAF Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KAT2B. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PCAF Antibody (E-8): sc-13124
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PCAF Plasmide Double Nickase (h) | sc-400753-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PCAF Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400753-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KAT2B codifica per l’acetiltransferasi istonica PCAF, un coattivatore della famiglia GNAT che acetila istoni e substrati non istonici per regolare l’accessibilità della cromatina e i programmi trascrizionali. PCAF partecipa al controllo della trascrizione tramite interazioni con complessi multiproteici e fattori di trascrizione, influenzando processi quali le risposte al danno al DNA, la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e la segnalazione da stress. Modulando l’espressione genica dipendente dall’acetilazione, PCAF contribuisce a vie frequentemente alterate nel cancro e in altri disturbi caratterizzati da disregolazione epigenetica. PCAF umano rappresenta quindi un nodo utile per studi meccanicistici che collegano il rimodellamento della cromatina a output trascrizionali specifici del contesto.
PCAF Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KAT2B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KAT2B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KAT2B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KAT2B interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.