PBR CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419383

概要

マウスのTspoは、末梢性ベンゾジアゼピン受容体（PBR）をコードしている。PBRは主にミトコンドリア外膜に局在する18 kDaのタンパク質で、コレステロールやポルフィリンに結合し、ミトコンドリアの恒常性維持を支える。PBRはコレステロール輸送およびステロイド産生代謝に関与し、ミトコンドリア膜透過性とアポトーシス関連シグナルを制御するとともに、活性酸素種（ROS）バランスや炎症応答にも影響を及ぼす。Tspo/PBRの発現は活性化ミクログリアや末梢免疫細胞で高く、神経炎症のマーカーとして広く用いられているほか、神経変性疾患や代謝ストレスの状況で観察されるミトコンドリア機能障害とも関連する。これらの機能により、Tspoは、細胞ストレスを免疫活性化や組織リモデリングへと結びつけるミトコンドリア関連シグナル伝達ネットワークを解析するうえで有用な結節点となる。

PBR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTspo遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tspo内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tspoのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PBRタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PBRシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tspo欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PBRの機能に不可欠なTspoエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tspoゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PBR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPBR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tspo遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PBR HDRプラスミド（m）および PBR HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTspoホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTspo標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。