PBGD Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-404924-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PBGDO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase PBGD (h) e o Plasmídeo Double Nickase PBGD (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para HMBS. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PBGD Anticorpo (E-9): sc-166743
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PBGD Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-404924-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PBGD Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-404924-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O HMBS humano codifica a porfobilinogênio desaminase (PBGD), uma enzima citosólica que catalisa a polimerização do porfobilinogênio em hidroximetilbilano durante a biossíntese do heme. Essa etapa sustenta a produção de heme necessária para a respiração mitocondrial, a função de citocromos e o manejo de oxigênio em tecidos eritroides e não eritroides. A atividade de HMBS integra-se ao metabolismo das porfirinas e à homeostase redox celular, vinculando a disponibilidade de heme às respostas ao estresse oxidativo e à adaptação metabólica. Alterações genéticas ou funcionais de HMBS estão associadas a defeitos no fluxo da via das porfirinas e são relevantes para estudos das porfirias hepáticas agudas e da regulação do heme em células eritroides.
PBGD O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus HMBS em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de HMBS. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função HMBS. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com HMBS interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.