Pax-7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422120

概要

Pax7は、骨格筋サテライト細胞を規定・維持し、発生および再生過程における筋形成系譜へのコミットメントを調整するペアードボックス型転写因子Pax-7をコードします。Pax-7は、前駆細胞の自己複製、生存、分化を制御する遺伝子発現プログラムを調節し、幹細胞の静止状態と活性化を微調整するNotchやWntなどのシグナル伝達ネットワークとも連携します。マウスモデルでは、Pax-7機能の変化が筋修復ダイナミクスとサテライト細胞プールの恒常性を乱し、筋萎縮、再生不全、発生性ミオパチーの基盤機構の研究における重要性が示されています。Pax-7はまた、筋形成の転写制御が主要な評価項目となる神経筋生物学および細胞運命研究において、マーカーおよび制御因子としても用いられます。

Pax-7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPax7遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Pax7内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Pax7のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Pax-7タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Pax-7シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Pax7欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Pax-7の機能に不可欠なPax7エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Pax7ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Pax-7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPax-7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Pax7遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Pax-7 HDRプラスミド（m）および Pax-7 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPax7ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPax7標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。