Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Pax-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422115
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Pax-2 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Pax-2, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Pax-2 Antibody (60-P): sc-130387
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Pax-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-422115 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene murino *Pax2* codifica Pax-2, un fattore di trascrizione della famiglia “paired box” che regola programmi di espressione genica durante l’organogenesi, in particolare nello sviluppo del rene, del nervo ottico/retina e dell’orecchio interno. Pax-2 contribuisce alla specificazione di linea e alla differenziazione epiteliale coordinando reti trascrizionali dello sviluppo e il crosstalk con vie di segnalazione quali WNT e Notch. Un’attività alterata di PAX2 è associata ad anomalie congenite del rene e delle vie urinarie e a difetti dello sviluppo oculare, rendendo Pax2 un marcatore ampiamente utilizzato e un nodo meccanicistico negli studi di sviluppo e di modellizzazione delle malattie. Nei sistemi cellulari, Pax-2 influenza proliferazione, morfogenesi e mantenimento dell’identità tessuto-specifica attraverso il legame diretto al DNA e complessi di repressione/attivazione trascrizionale.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Pax-2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pax2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pax2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pax2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Pax-2.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pax2 per lo studio della segnalazione di Pax-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Pax2 critici per la funzione di Pax-2
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pax2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Pax-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Pax-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pax2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Pax-2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Pax-2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pax2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pax2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.