Pax-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422114

概要

マウスPax1は、ペアードボックス転写因子Pax-1をコードしており、胚発生の過程で系譜の特定やパターニングを制御する核内DNA結合タンパク質です。とりわけ、傍軸中胚葉および発生中の脊椎において重要な役割を担います。Pax-1は発生シグナルからの入力を統合し、軟骨形成、硬節（sclerotome）の分化、体軸骨格の分節構造化に関わる転写プログラムを制御します。Pax1機能の異常は先天性の椎骨・骨格奇形と関連づけられており、脊椎形成や筋骨格系発生の研究においてマーカーおよび制御因子として用いられています。細胞モデルでは、間葉系および軟骨前駆細胞の文脈における増殖・分化を司る転写ネットワークに対するPax-1活性の影響が検討されています。

Pax-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPax1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Pax1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Pax1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Pax-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Pax-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Pax1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Pax-1の機能に不可欠なPax1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Pax1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Pax-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPax-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Pax1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Pax-1 HDRプラスミド（m）および Pax-1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPax1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPax1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。