patched/PTCH1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400457

概要

PTCH1はpatchedをコードしており、patchedは12回膜貫通型受容体として、リガンドが存在しない条件下でSMOを阻害することでHedgehogシグナル伝達を抑制します。Sonic/Indian/Desert Hedgehogが結合するとこの抑制が解除され、胚のパターニング、組織恒常性、細胞運命決定を制御するGLI依存的な転写プログラムが活性化します。PTCH1の活性は、膜におけるステロール輸送や一次繊毛でのトラフィッキングとシグナル出力を結び付け、増殖と分化を調節する各種の入力シグナルを統合します。PTCH1–Hedgehogシグナルの異常は発生異常や腫瘍形成過程に関与することが示されており、PTCH1はシグナル経路研究および遺伝子型—表現型解析における重要な結節点となります。

patched/PTCH1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPTCH1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PTCH1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PTCH1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、patched/PTCH1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、patched/PTCH1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PTCH1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• patched/PTCH1の機能に不可欠なPTCH1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PTCH1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• patched/PTCH1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびpatched/PTCH1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PTCH1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  patched/PTCH1 HDRプラスミド（h）および patched/PTCH1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPTCH1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPTCH1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。