Partículas Lentivirales de Activación (h) parvalbumin α: sc-401364-LAC

PVALB codifica la parvalbúmina α, una proteína de unión al calcio de alta afinidad con motivo EF-hand que amortigua el Ca²⁺ intracelular y modula la amplitud y la cinética de los transitorios de calcio. En células excitables, la parvalbúmina contribuye a la señalización dependiente de calcio, influyendo en procesos como la liberación de neurotransmisores acoplada a potenciales de acción y la regulación génica dependiente de la actividad. Se utiliza ampliamente como marcador molecular de poblaciones de interneuronas GABAérgicas de disparo rápido y se estudia con frecuencia en el contexto de la dinámica de los circuitos neuronales y la homeostasis del calcio. La desregulación de la expresión de PVALB o la alteración de la función de las interneuronas positivas para parvalbúmina se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, lo que impulsa estudios mecanísticos sobre el equilibrio excitación–inhibición y las vías reguladas por Ca²⁺.

Las partículas de activación lentiviral parvalbumin α (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PVALB en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral parvalbumin α (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PVALB, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de parvalbumin α. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PVALB y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.