Plasmide Double Nickase (h) PARG: sc-404382-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PARG correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PARG Double Nickase (h) et le plasmide PARG Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PARG. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PARG Antibody (H-1): sc-398563
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) PARG | sc-404382-NIC | 20 µg | $410.00 |
La poly(ADP-ribose) glycohydrolase (PARG) est la principale enzyme qui hydrolyse les chaînes de poly(ADP-ribose) (PAR), contrebalançant la PARylation dépendante de PARP lors de la réponse aux dommages de l’ADN. En contrôlant le renouvellement du PAR, PARG module la dynamique de la chromatine, les réponses au stress de réplication et la résolution des assemblages de signalisation dépendants du PAR qui se forment au niveau des lésions de l’ADN. L’activité de PARG s’entrecroise avec les voies régissant la réparation des cassures simple brin, la stabilité des fourches de réplication et l’intégrité du génome, et une altération du métabolisme du PAR a été associée à des phénotypes de réparation de l’ADN liés aux tumeurs ainsi qu’à des réponses au stress pertinentes pour la neurodégénérescence. En tant que régulateur central de l’homéostasie de la PARylation, PARG est largement utilisé comme point d’entrée pour disséquer l’architecture de la voie PARP–PARG et les mécanismes de recrutement protéique induits par le PAR.
PARG Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PARG dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PARG. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PARG. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PARG.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.