PAR-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420267

概要

マウスのF2rl3は、プロテアーゼ活性化受容体4（PAR-4）をコードしている。PAR-4はGタンパク質共役型受容体であり、トロンビンなどのセリンプロテアーゼによって、受容体に結合したリガンドがプロテオリシスにより露出（アンマスキング）されることで活性化される。PAR-4は主としてGqおよびG12/13シグナルと共役し、細胞内Ca2+動員、RhoA/ROCK依存的な細胞骨格リモデリング、さらに下流のMAPKおよびNF-κB経路の応答を引き起こすことで、血小板活性化、炎症シグナル、血管恒常性の制御に関与する。免疫および血管の文脈において、F2rl3/PAR-4の活性は細胞接着やバリア機能の調節に寄与し、血栓症、炎症、心代謝ストレスのモデルでしばしば研究されている。PAR-4シグナルの変化は腫瘍関連微小環境からのシグナルとも関連づけられており、止血と炎症のクロストーク機構研究における重要性を裏づけている。

PAR-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるF2rl3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、F2rl3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、F2rl3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PAR-4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PAR-4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、F2rl3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PAR-4の機能に不可欠なF2rl3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、F2rl3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PAR-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPAR-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、F2rl3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PAR-4 HDRプラスミド（m）および PAR-4 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはF2rl3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のF2rl3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。