PAPP-A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422113

Descripción general

El gen Pappa en ratón codifica la proteína plasmática A asociada al embarazo (PAPP-A), una metaloproteinasa secretada que escinde proteínas de unión a los factores de crecimiento similares a la insulina (IGFBP), especialmente IGFBP4, para aumentar la biodisponibilidad local de IGF. Al modular la señalización de IGF1/IGF2 a través de IGF1R y las cascadas posteriores PI3K–AKT y MAPK, PAPP-A influye en la proliferación, supervivencia y diferenciación celular, así como en la remodelación de la matriz extracelular. La actividad de PAPP-A se ha vinculado a procesos como la biología placentaria y reproductiva, el comportamiento del músculo liso vascular y la reparación tisular, por lo que resulta relevante para estudios mecanísticos de la regulación del crecimiento y la remodelación asociada a la inflamación. La desregulación del control del eje IGF que involucra a PAPP-A se examina con frecuencia en modelos de disfunción metabólica, patología cardiovascular e interacciones estromales asociadas al cáncer, sin que ello implique resultados clínicos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PAPP-A (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pappa en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pappa junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pappa tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PAPP-A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pappa para la investigación de la señalización de PAPP-A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Pappa críticos para la función de PAPP-A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pappa para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PAPP-A CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PAPP-A CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pappa. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PAPP-A (m) y el plásmido HDR PAPP-A (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pappa para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pappa definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.