PAPP-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422113

概要

マウスのPappaは、妊娠関連血漿タンパク質A（PAPP-A）をコードしており、インスリン様成長因子結合タンパク質（IGFBP）、とくにIGFBP4を切断する分泌型メタロプロテアーゼである。これにより局所のIGFの生物学的利用能（バイオアベイラビリティ）が高まる。PAPP-Aは、IGF1Rを介したIGF1/IGF2シグナルと、その下流のPI3K–AKTおよびMAPKカスケードを調節することで、細胞増殖・生存・分化、ならびに細胞外マトリックスのリモデリングに影響を与える。PAPP-A活性は、胎盤や生殖に関わる生物学的過程、血管平滑筋の挙動、組織修復などのプロセスと関連づけられており、成長制御や炎症に伴うリモデリングの機序研究において重要である。PAPP-Aが関与するIGF軸制御の破綻は、臨床的転帰を示唆するものではなく、代謝機能障害、心血管病態、がん関連ストローマ相互作用のモデルでしばしば検討される。

PAPP-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPappa遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Pappa内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Pappaのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PAPP-Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PAPP-Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Pappa欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PAPP-Aの機能に不可欠なPappaエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Pappaゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PAPP-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPAPP-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Pappa遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PAPP-A HDRプラスミド（m）および PAPP-A HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPappaホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPappa標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。