PAPP-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406222

概要

PAPPAは、妊娠関連血漿タンパク質A（PAPP-A）をコードしており、pappalysinファミリーに属する分泌性メタロプロテアーゼです。PAPP-Aは、IGF結合タンパク質（IGF-binding proteins）—とりわけIGFBP4およびIGFBP5—を切断することで、インスリン様成長因子（IGF）の生物学的利用能（bioavailability）を調節します。局所の遊離IGF量を増加させることで、PAPP-AはPI3K–AKTやMAPK/ERKなどのIGF1R駆動性シグナル伝達経路を調節し、組織リモデリングの文脈における細胞増殖、分化、生存に影響を及ぼします。PAPP-A活性はまた、細胞外マトリックス近傍でのプロテオリシスや、血管および間質の微小環境における増殖因子シグナルの傍分泌的制御とも関連しています。PAPPAの発現や活性の破綻は、胎盤生物学、動脈硬化プラークの生物学、炎症性の心代謝表現型と関連づけられており、疾患関連の細胞種におけるIGF軸制御の機序研究を促す要因となっています。

PAPP-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPAPPA遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PAPPA内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PAPPAのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PAPP-Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PAPP-Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PAPPA欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PAPP-Aの機能に不可欠なPAPPAエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PAPPAゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PAPP-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPAPP-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PAPPA遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PAPP-A HDRプラスミド（h）および PAPP-A HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPAPPAホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPAPPA標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。