PAP-β Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403907

Panoramica

PAPOLB codifica la poli(A) polimerasi beta (PAP-β), un enzima di poliadenilazione non canonico con espressione arricchita nelle cellule germinali maschili, che supporta il controllo post-trascrizionale durante la spermatogenesi. Estendendo le code poli(A) su specifici mRNA, PAP-β influenza la stabilità dei trascritti, l’esportazione nucleare e l’attivazione della traduzione, integrandosi con reti più ampie di processamento dell’RNA e di sorveglianza dell’mRNA. Un’attività alterata di PAPOLB è stata associata a difetti nello sviluppo degli spermatozoi e a fenotipi di fertilità compromessa, rendendolo rilevante per gli studi sulla regolazione genica nella linea germinale. PAPOLB costituisce anche un modello per analizzare come poli(A) polimerasi specializzate plasmino programmi di espressione genica specifici di stadio.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PAP-β (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PAPOLB in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PAPOLB insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PAPOLB a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PAP-β.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PAPOLB per lo studio della segnalazione di PAP-β, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PAPOLB critici per la funzione di PAP-β
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PAPOLB per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PAP-β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PAP-β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PAPOLB. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PAP-β Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PAP-β (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PAPOLB per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PAPOLB definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.