PAP-β CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403907

概要

PAPOLBは、非典型的なポリ(A)付加酵素であるポリ(A)ポリメラーゼβ（PAP-β）をコードしており、雄性生殖細胞で発現が高く、精子形成（spermatogenesis）における転写後制御を支えています。PAP-βは特定のmRNAのポリ(A)テールを伸長することで、転写産物の安定性、核外輸送、翻訳活性化に影響を与え、より広範なRNAプロセシングネットワークやmRNA監視機構とも連携します。PAPOLB活性の変化は、精子の発生異常や生殖能低下の表現型と関連づけられており、生殖系列における遺伝子制御の研究において重要です。またPAPOLBは、特殊化したポリ(A)ポリメラーゼが段階特異的な遺伝子発現プログラムをどのように形成するかを解明するためのモデルにもなります。

PAP-β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPAPOLB遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PAPOLB内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PAPOLBのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PAP-βタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PAP-βシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PAPOLB欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PAP-βの機能に不可欠なPAPOLBエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PAPOLBゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PAP-β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPAP-β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PAPOLB遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PAP-β HDRプラスミド（h）および PAP-β HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPAPOLBホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPAPOLB標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。