PAO CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-432791

概要

マウスSmoxは、ポリアミンの逆変換を触媒するフラビン依存性酵素であるポリアミンオキシダーゼ（PAO）をコードしており、スペルミンおよびスペルミジンの恒常性維持に寄与するとともに、細胞内のポリアミンフラックスを制御します。PAO活性は、過酸化水素および反応性アルデヒドの産生を介してポリアミン代謝を細胞のレドックスバランスと結び付け、酸化ストレス応答、ミトコンドリア機能、炎症シグナル伝達に影響を与えます。SMOX/PAOの制御異常は、増殖制御の破綻、DNA損傷への感受性、組織障害と関連することが示されており、がん生物学や神経炎症モデルなど、ポリアミンのターンオーバーとROSシグナルが交差する文脈で報告されています。代謝の要所（ノード）としてPAOは、ポリアミン分解が細胞運命決定やストレス適応経路をどのように調節するかを研究するための機序的な入口を提供します。

PAO CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSmox遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Smox内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Smoxのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PAOタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PAOシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Smox欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PAOの機能に不可欠なSmoxエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Smoxゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PAO CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPAO CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Smox遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PAO HDRプラスミド（m）および PAO HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSmoxホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSmox標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。