Pancreatic Lipase CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402264-ACT

PNLIP kodiert die pankreatische Lipase, eine sezernierte digestive Hydrolase, die im Darmlumen die Hydrolyse von Nahrungs-Triacylglycerolen zu Monoacylglycerolen und freien Fettsäuren katalysiert. An der Lipid-Wasser-Grenzfläche wirkt PNLIP zusammen mit Colipase und Gallensalzen und unterstützt so die intestinale Lipidresorption sowie die nachgeschaltete metabolische Verarbeitung von Fettsäuren und fettlöslichen Nährstoffen. Eine veränderte PNLIP-Expression oder -Aktivität wurde mit exokriner Pankreasdysfunktion und Störungen der Fettverdauung in Verbindung gebracht, und PNLIP wird in Studien zur Biologie pankreatischer Azinuszellen häufig als funktioneller Marker eingesetzt. Da die Lipidverdauung die systemische Energiebilanz und Nährstoffsignale beeinflusst, ist PNLIP auch für die Forschung an metabolischen Phänotypen relevant, die mit der Pankreasfunktion verknüpft sind.

Pancreatic Lipase Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PNLIP-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Pancreatic Lipase Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PNLIP-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PNLIP-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Pancreatic Lipase-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PNLIP-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Pancreatic Lipase-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Pancreatic Lipase-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PNLIP-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.