Plasmide Double Nickase (h) Pael-R: sc-405223-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Pael-R correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Pael-R Double Nickase (h) et le plasmide Pael-R Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GPR37. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Pael-R Antibody (G-6): sc-390110
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Pael-R | sc-405223-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Pael-R | sc-405223-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPR37 (Pael-R) code un récepteur orphelin couplé aux protéines G, enrichi dans les neurones et les cellules gliales, impliqué dans la régulation du trafic des récepteurs, de la protéostasie et des réponses au stress cellulaire. Pael-R est maturé via le réticulum endoplasmique et les voies de contrôle qualité, et son mauvais repliement ou une dégradation insuffisante peuvent activer la signalisation de la réponse aux protéines mal repliées (UPR) et, en aval, des programmes apoptotiques ou inflammatoires. Dans le système nerveux, GPR37 a été associé à la biologie des circuits dopaminergiques et à la neuroinflammation, avec une pertinence pour les études mécanistiques de phénotypes parkinsoniens et d’autres processus neurodégénératifs apparentés. La modulation expérimentale de GPR37 permet d’explorer la signalisation des RCPG, l’homéostasie des récepteurs membranaires et la résilience au stress spécifique de certains types cellulaires.
Pael-R Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GPR37 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GPR37. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GPR37. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GPR37.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.